天然产物研究与开发 ›› 2019, Vol. 31 ›› Issue (8): 1350-1356.doi: 10.16333/j.1001-6880.2019.8.007
陈小宇1#，陈颖1#，曲传俊1，李德芳1，郑秋生1,2*
CHEN Xiao-yu1#,CHEN Ying1#,QU Chuan-jun1,LI De-fang1,ZHENG Qiu-sheng1,2*
摘要： 为研究臭椿酮（Ailanthone，AIL）诱导人黑色素瘤A375细胞凋亡的作用及作用机制，以人黑色素瘤A375细胞为研究对象，采用MTT法测定AIL对人黑色素瘤A375细胞生长增殖的抑制作用。用倒置相差显微镜观察AIL对A375细胞形态的影响，用荧光倒置显微镜观察Hoechst 33258染色后AIL对A375细胞核的影响，用Annexin V-FITC/PI双染法检测AIL诱导A375细胞凋亡的作用，用分光光度法检测caspase-3和caspase-9的活性，Western blot检测p-PI3Kβ（Ser1070），PI3Kβ，p-Akt（Ser473）和Akt蛋白表达水平的变化，接着用PI3K抑制剂LY294002进行干预，进一步验证AIL对PI3K/Akt信号通路及细胞凋亡的影响。实验结果表明，AIL能够明显抑制A375细胞增殖，使A375细胞数目变少、附着力和透光性减弱，AIL能够诱导A375细胞凋亡，使其细胞核染色质发生固缩并呈现高亮，且使A375细胞早期及晚期凋亡率均增加，AIL作用后能够使caspase-3和caspase-9活性增加，AIL能够抑制PI3K和Akt蛋白磷酸化，从而使PI3K/Akt信号通路失活。较AIL单独作用，AIL和LY294002共同作用后对PI3K和Akt蛋白磷酸化的抑制作用增强且诱导凋亡作用增加，进一步说明AIL通过失活PI3K/Akt信号通路来诱导A375细胞凋亡。
中图分类号:
R93
