大孔树脂结合半制备型高效液相色谱分离纯化桃儿七中鬼臼毒素研究

天然产物研究与开发 ›› 2021, Vol. 33 ›› Issue (增刊2): 73-83.

大孔树脂结合半制备型高效液相色谱分离纯化桃儿七中鬼臼毒素研究

许显莉1,2,3，刘盈盈1,2,3，沈建伟1，冯海生1,2，马世震1,2*，李彩霞1,2*

1中国科学院西北高原生物研究所；2青海省青藏高原特色生物资源研究重点实验室，西宁 810008；3中国科学院大学，北京 100049

出版日期:2021-12-28 发布日期:2021-11-23
基金资助:
青海省应用基础研究（2019-ZJ-7061）

Study on separation and purification of podophyllotoxin from Sinopodophyllum hexandrum using microporous resin combined with preparative high-performance liquid chromatography

XU Xian-li1,2,3,LIU Ying-ying1,2,3,SHEN Jian-wei1,FENG Hai-sheng1,2,MA Shi-zhen1,2*,LI Cai-xia1,2*

1Northwest Institute of Plateau Biology,Chinese Academy of Sciences;2 Qinghai Key Laboratory of Qinghai-Tibet Plateau Biological Resources,Xining 810008,China;3University of Chinese Academy of Sciences,Beijing 100049,China

Online:2021-12-28 Published:2021-11-23

摘要/Abstract

摘要：

本研究使用大孔树脂结合半制备型高效液相色谱（PHPLC），对桃儿七中鬼臼毒素进行了分离纯化。先通过大孔树脂静态吸附试验比较了12种树脂吸附和解析鬼臼毒素的性能，确定最佳树脂型号；并通过动态吸附试验，考察上样浓度、上样体积、上样流速、洗脱浓度、洗脱流速和洗脱体积对树脂分离效果的影响，确定最佳工艺条件。再经PHPLC进行进一步分离纯化，考察不同色谱柱、流动相配比、进样量、流量等因素对分离效果的影响，确定适宜条件。最后，对所得最终产物进行纯度和化学结构鉴定。试验结果表明，HPD-100树脂为最佳树脂，其分离纯化鬼臼毒素的最佳条件为：上样浓度为0.46 mg/mL、上样体积为60 mL、上样流速为3 mL/min、洗脱浓度为80%、洗脱流速为3 mL/min、洗脱体积为120 mL。PHPLC进一步分离纯化的适宜条件为：色谱柱为Megres或Dubehe;流动相为乙腈-水溶液（34∶66）;体积流量为14 mL/min;进样量为1 mL。最终产物经鉴定，纯度＞98%，结构为鬼臼毒素。本文建立桃儿七中鬼臼毒素的分离纯化方法分离效果好、制备效率高、易于工业化，可用于大规模分离制备。

关键词: 大孔树脂, 半制备型高效液相色谱, 桃儿七, 鬼臼毒素, 分离纯化

Abstract:

To establish a method for separating and purifying podophyllotoxin (PPT) from Sinopodophyllum hexandrum using microporous resin combined with preparative high-performance liquid chromatography (PHPLC).Fristly,static adsorption test was used for choosing the best type of microporous resin.Secondly,the optimum conditions (the load solution concentration,volume and flow rate of loading solution,and eluent concentration,eluent volume and eluent flow rate) were determined by dynamic adsorption experiment.Finally,PHPLC was used for isolating and purifying PPT.The confirmation of chemical structures was performed by ¹H NMR and ¹³C NMR.The optimum purification conditions of microporous resin was obtained as follows:the 60 milliliter of 0.46 mg/mL PPT extract was loaded on the resin column at flow rate of 3 mL/min and eluted with 120 milliliter of 80% ethanol at flow rate of 3 mL/min.PPT with high purity was obtained by preparative HPLC with a C₁₈ column (Megres)by using 34% acetonitrile in ultrapure water at a constant flow rate of 14 mL/min and a sample volume of 1mL.HPLC analysis showed that the purities of PPT > 98%,and the structure was confirmed as PPT.The method is simple,economic,efficient and can be applied to the separation and preparation of PPT from Sinopodophyllum hexandrum.

Key words:

microporous resin;preparative high-performance liquid chromatography;isolation and purification;Sinopodophyllum hexandrum, podophyllotoxin

中图分类号: R932

许显莉, 刘盈盈, 沈建伟, 冯海生, 马世震, 李彩霞. 大孔树脂结合半制备型高效液相色谱分离纯化桃儿七中鬼臼毒素研究[J]. 天然产物研究与开发, 2021, 33(增刊2): 73-83.

XU Xian-li, LIU Ying-ying, SHEN Jian-wei, FENG Hai-sheng, MA Shi-zhen, LI Cai-xia.

Study on separation and purification of podophyllotoxin from Sinopodophyllum hexandrum using microporous resin combined with preparative high-performance liquid chromatography

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